RESUMO: Talassemias e hemoglobinopatias são condições hereditárias encontradas em humanos de todo o mundo. Em medicina veterinária, o polimorfismo de hemoglobinas tem sido estudado em animais de produção, mas não existem relatos de hemoglobinopatias em cães, e os estudos envolvendo o polimorfismo de hemoglobinas nesta espécie são escassos. Com o objetivo de pesquisar variantes da hemoglobina em cães, foram coletadas amostras de sangue de 202 caninos de variadas raças, sendo 130 portadores de anemia crônica (Grupo Experimental) e 72 animais clinicamente saudáveis (Grupo Controle). Estas amostras foram submetidas à eletroforese alcalina de hemoglobinas, que permitiu a separação e quantificação das frações de hemoglobina por densitometria, e posteriormente submetidas à eletroforese de hemoglobinas em meio ácido, técnica utilizada em medicina humana para a separação de frações de hemoglobinas variantes que não se diferenciam em meio alcalino. O eritrograma e índices hematimétricos foram obtidos concomitantemente. Os métodos utilizados demonstraram que a HbA é o maior componente da hemoglobina canina, e que uma pequena quantidade de HbA2 pode ser detectada em uma parcela dos animais avaliados, sendo que a maioria dos caninos apresentava exclusivamente HbA em sua composição. Concluiu-se que a presença ou ausência de HbA2 não interfere nos índices hematimétricos dos animais avaliados, e que quando comparadas as hemoglobinas dos grupos Experimental e Controle, não são observadas diferenças na distribuição das frações destas, além de não serem observadas hemoglobinas variantes nos caninos avaliados.

ABSTRACT: Thalassemias and hemoglobinopathies are hereditary conditions found in humans throughout the world. In veterinary medicine, hemoglobin polymorphism has been studied in production animals, but there are no reports of hemoglobinopathies in dogs, and studies involving hemoglobin polymorphism in this species are scarce. In order to search for hemoglobin variants in dogs, blood samples were collected from 202 dogs of various breeds, being 130 patients with chronic anemia (Experimental Group) and 72 clinically healthy animals (Control Group). These samples were subjected to alkaline electrophoresis of hemoglobin, which permitted separation and quantification of hemoglobin fractions by densitometry, and then subjected to hemoglobin electrophoresis in an acid medium, a technique used in human medicine for the separation of variant fractions of hemoglobin that do not differentiate in an alkaline medium. The erythrogram and RBC indices were obtained concurrently. The methods demonstrated that HbA is the major component of canine hemoglobin, and a small amount of HbA2 can be detected in some of the evaluated animals, and most dogs showed only HbA in its composition. It was concluded that the presence or absence of HbA2 does not interfere with RBC indices of evaluated animals, and the comparison between the hemoglobin of Experimental and Control groups showed no differences in fractions distribution between them, and there was no hemoglobin variants in evaluated canines.

Resumo O lavado traqueobrônquico (LTB) é um método usado para recuperar uma amostra de células das vias respiratórias. A citologia do LTB é descrita como uma importante ferramenta no diagnóstico de doença pulmonar em equinos. O excesso de muco geralmente presente no LTB pode alterar a morfologia, dificultando a identificação dos tipos celulares e, por consequência, prejudicando a contagem diferencial de células e a interpretação diagnóstica. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da filtração do LTB de equinos sobre a contagem diferencial de células na avaliação citológica do lavado traqueobrônquico. Foram utilizados 30 equinos que foram submetidos a coletas de amostras de LTB via endoscópio. De cada amostra obtida foi separada uma primeira alíquota não filtrada (NF). Uma segunda alíquota (F) foi obtida filtrando-se o LTB, utilizando-se uma compressa de gaze hidrófila. As alíquotas F e NF foram submetidas à citocentrifugação para contagem diferencial de 300 células nucleadas. Verificou-se um aumento significativo no percentual de macrófagos e redução significativa de neutrófilos nas amostras filtradas. As alterações observadas foram condizentes com achados de estudos prévios realizados em lavado broncoalveolar. Conclui-se que a filtração do LTB não é uma metodologia aconselhável, pois acarreta em alterações de contagem significativas nas proporções de importantes marcadores celulares de inflamação, podendo gerar possíveis erros de diagnóstico.

Abstract Tracheobronchial wash (TBW) is a method to recover cell samples from the airways. The cytology of TBW fluid is an important technique for the diagnosis of pulmonary diseases in horses. Excessive mucus in TBW may cause cell damage and morphological changes that hinder cell type recognition, resulting in a misdiagnosis. The aim of this study was to compare the results of differential cell count in a tracheobronchial wash of filtered and non-filtered samples. Endoscopy and TBW procedures were performed in thirty horses. Each TBW sample was split into two aliquots. Two groups were formed: non-filtrated aliquots (NF) and filtrated aliquots (F). The filtration was performed using a hydrophilic gauze pad. After centrifugation, the differential cell count was performed considering 300 nucleated cells. The filtrated aliquots results presented a significant increase of macrophages count and a significant decrease in neutrophils count comparing to the results of non-filtrated aliquots. These findings were consistent with results of filtered bronchoalveolar wash published studies. Therefore, the filtration of TBW is not an efficient method.

O Cell-Dyn 3500 é um citômetro de fluxo multi-parâmetros que realiza várias análises simultâneas em diversas espécies de animais. Ele realiza a contagem total de leucócitos, de hemácias e de plaquetas, além do diferencial de leucócitos, o volume globular e a determinação de hemoglobina. O Cell-Dyn 3500 realiza a contagem total de leucócitos, tanto pelo método óptico quanto pela impedância. O equipamento pode escolher um ou outro método, baseado na confiabilidade dos resultados. A contagem de hemáceas e plaquetas é determinada pelo método de impedância. A diferenciação de leucócitos é baseada em um princípio óptico de análise, utilizando-se separação em luz polarizada multiangular. O objetivo deste trabalho foi comparar os resultados de hemogramas, realizados pelo Cell-Dyn 3500, com aqueles realizados por um contador celular semi-automático (Celm CC-510) e pela técnica manual. Amostras de sangue foram colhidas da veia jugular, em tubos de 5,0 ml à vácuo com EDTA, de 58 novilhas Nelore de 24 meses de idade. As amostras foram processadas paralelamente nas três técnicas. Os resultados foram analisados pelo teste t pareado, correlação de Pearson e pelo método de Bland-Altmann. Houve forte correlação entre os resultados hematológicos obtidos pelo Cell-Dyn 3500, pelo método manual e pelo contador celular semi-automático (Celm CC-510), exceto para a contagem de basófilos e monócitos. Esses resultados confirmam que o equipamento é confiável para a análise de amostras de sangue de gado zebuíno.

The Cell-dyn 3500 is a multiparameter flow cytometer, which may analyze samples from several species performing several simultaneous analyses. It is able to perform white blood cells, red blood cells and platelet counts, besides differential leukocyte counts, packed cell volume and hemoglobin determination. Cell-Dyn 3500 performs total leukocyte count both optically and by impedance. The equipment may choose one or other method, based on the reliability of the results. Erythrocyte and platelet counts are determined by impedance. Leukocyte differentiation is based on an optical principle, using separation in multiangular polarized light. The objective of this study was to compare the results of complete blood count of Zebu Nellore heifers from Cell-dyn 3500, with those obtained from a semi-automated cell counter (Celm CC 510) and the manual technique. Blood samples were collected from the jugular vein in 5 mL EDTA vacuum tubes from 58 Nellore heifers, at 24 months of age. Samples were processed in parallel in the three different techniques. Results were analyzed using paired t test, Pearson's correlation and the Bland-Altmann method. There was a strong correlation for all parameters analyzed by Cell-Dyn 3500, manual method and semi-automated cell counter, except for basophils and monocytes counts. These results confirm that this analyzer is reliable for blood samples analysis of zebu cattle.

A utilidade da determinação das atividades enzimáticas no trato respiratório posterior como ferramenta diagnóstica já foi demonstrada em várias espécies. Nesse contexto, este trabalho teve por objetivo determinar a atividade da Fosfatase Alcalina (FAL) no lavado broncoalveolar (LBA) de equinos da Polícia Militar do Estado do Rio de Janeiro, comparando animais sadios com portadores assintomáticos de doença inflamatória das vias aéreas (DIVA). Para tal, foram avaliados 28 animais adultos, machos, sem histórico de doença respiratória nos dois meses anteriores ao estudo, com os resultados dos exames físicos e laboratoriais (FAL sanguínea, hematócrito, leucograma, proteína total e fibrinogênio plasmáticos) dentro dos parâmetros fisiológicos. Os equinos foram divididos em dois grupos de acordo com o resultado da citologia broncoalveolar. A determinação da atividade da FAL foi realizada por meio de espectrofotometria a partir de alíquotas do sobrenadante do LBA preservadas em nitrogênio líquido. Para a estimativa do fluido epitelial pulmonar e da atividade da FAL neste, foi realizada a correção da diluição provocada pelo lavado. Os equinos com contagem diferencial de tipos celulares compatível com DIVA apresentaram atividade de FAL no LBA menor, quando comparados aos animais sadios, podendo essa dosagem ser utilizada como complementação do diagnóstico da DIVA.

The use of determining the enzymatic activities in the posterior respiratory tract as a diagnostic tool has already been demonstrated in several species. In this context, this paper aims to determine the activity of alkaline phosphatase (ALP) in the bronchoalveolar lavage (BAL) of horses from the Military Police of the State of Rio de Janeiro, comparing healthy animals with asymptomatic carriers of an inflammatory airway disease (IAD). Twenty-eight adult male animals with no history of respiratory diseases in the last two months prior to the study were studied. Physical exam and blood laboratory test results (ALP, hematocrit, leukogram, total protein and plasma fibrinogen) were within physiological parameters. The equines were separated into two groups according to the results of the bronchoalveolar cytology. The determination of ALP was done by spectrophotometry with aliquots of the supernatant of the BAL preserved in liquid nitrogen. To estimate pulmonary epithelial lining fluid and ALP activity, correction of the dilution caused by the lavage was done. The horses with a cell type differential count compatible with IAD presented a lower ALP activity in BAL when compared to healthy animals, therefore this dosage can be used as a complement in the diagnosis of IAD.

Doenças inflamatórias pulmonares são observadas na espécie equina desde sua domesticação. Dentre as enfermidades de maior importância do trato respiratório equino, estão os distúrbios não infecciosos de vias aéreas posteriores. Este trabalho teve por objetivo determinar o perfil citológico e o efeito da idade na avaliação do lavado broncoalveolar (LBA) de equinos sadios e com Doença Inflamatória das Vias Aéreas (DIVA) assintomática. Foram utilizados 32 equinos adultos, aparentemente sadios, de ambos os sexos (20 machos e 12 fêmeas), com faixa etária média semelhante, sendo 15 animais do grupo controle e 17 animais do grupo doente assintomático. Os grupos foram estabelecidos segundo os critérios de GERBER et al. (2004) para acúmulo de muco traqueal após a realização de exames físicos diretos e endoscopia traqueal. Foi realizado o LBA e o percentual dos valores médios obtidos na análise citológica dos cavalos sadios e com DIVA assintomática foram, respectivamente: 56,9% e 48,0% de macrófagos, 37,2% e 40,0% de linfócitos, 3,3% e 7,1% de neutrófilos, 1,7% e 1,4% de mastócitos, 0,3% e 0,7% de eosinófilos; e 0,5% e 0,4% de células epiteliais. Concluiu-se que a DIVA nos animais integrantes do grupo doente assintomático caracterizou- se por um discreto infiltrado de neutrófilos e que a idade não influencia na avaliação citológica do LBA.

Pulmonary inflammatory diseases have been observed in equine since their domestication. Non-infectious disease processes of the lower airways are amongst the most important diseases of the equine respiratory tract. This study aims to determine the cytology profile and effect of age on the evaluation of equine bronchoalveolar lavage (BAL) obtained from healthy animals and from horses with asymptomatic inflammatory airway disease (IAD). Thirty two horses, including 20 males and 12 females, without clinical signs of pulmonary disease and with age varying from 4 to 21 years, were assigned to two groups: 15 animals in the control group and 17 in the asymptomatic group. Groups were divided according to physical examination and mucous accumulation observed during tracheal endoscopy. The BAL results from healthy and asymptomatic horses were, respectively: 56.9% and 48.0% macrophages, 37.2% and 40.0% lymphocytes, 3.3% and 7.1% neutrophils, 1.7% and 1.4% mast cells, 0.3% and 0.7% eosinophils; 0,5% and 0.4% epithelial cells. When horses in the two groups were analyzed according to their age range, no differences were found. In conclusion, IAD in the asymptomatic group was significantly different from the control group. The asymptomatic horses presented a discrete infiltrate of neutrophils, which does not influence cytological evaluation of BAL.

Avaliaram-se os efeitos da técnica de biópsia hepática sobre as atividades séricas das enzimas gama glutamil transferase (GGT), aspartato amino transferase (AST), fosfatase alcalina (FA), hemograma e fibrinogênio em 36 novilhas Nelore. Os animais foram submetidos ao procedimento de colheita de fragmento hepático, utilizando-se agulha de biópsia para determinação dos elementos minerais. As avaliações da bioquímica sérica foram realizadas em 20 novilhas, sendo divididas em dois grupos. No grupo 1 (n=10), colheu-se sangue em tubos a vácuo sem anticoagulante, antes da realização da biópsia e 24h após, e no grupo 2 (n=10) antes da biópsia e 96h após. Os valores do hemograma e do fibrinogênio foram obtidos antes e 96h após a realização do procedimento (n=16). A atividade sérica da AST aumentou significativamente (54,4%) 24h após a realização da biópsia, porém estava dentro dos valores de referência 96h após o procedimento. As atividades séricas da GGT e da FA não sofreram aumentos nas 24h e 96h após a biópsia. A proteína total apresentou aumento significativo de 0,24g/dL 96h após o procedimento. Os demais parâmetros avaliados permaneceram dentro dos valores normais para a espécie. Os resultados obtidos permitem concluir que a técnica de biópsia hepática empregada é segura e eficaz por não provocar dano hepático significativo e por obter rapidamente fragmentos adequados para análise bromatológica e histopatológica.

The effects of liver biopsy technique on GGT (gama glutamil transferase), AST (aspartate amino transferase), FA (alcaline transferase) serum activity, complete blood counting and fibrinogen were evaluated in 36 Nelore breed heifers. The animals were submitted to liver biopsy, using biopsy needle for mineral element determination. The biochemical profile evaluation were obtained in 20 heifers, being divided in two groups. In group 1 (n=10), blood was obtained with vacuum tubes without anticoagulant before and 24h after biopsy, while in group 2 (n=10) before and 96h after biopsy. The complete blood count and fibrinogen values were obtained before and 96h after biopsy (n=16). The AST serum activity increased (54.4%) 24h after biopsy, but was within normal range after 96h. The GGT and FA serum activity did not increase 24h and 96h after biopsy. The total serum protein showed increase of 0.24g/dL 96h after biopsy. The others parameters evaluated were within normal range for the species. The results allowed to conclude that the liver biopsy technique used shows safety and efficiency as it has not caused significant liver injury and has obtained fragments suitable for bromatologic and histopathologic analyses promptly.

Avaliou-se as mudanças nos constituintes do hemograma de bovinos da raça Nelore, 71 machos e 56 fêmeas, no primeiro mês de vida, criados no Estado de São Paulo. Foram utilizadas 127 amostras de sangue de bezerros criados a pasto, divididos em cinco grupos: de 0-3, 3-7, 7-14 , 14-21 e 21-30 dias de idade. Os valores médios encontrados foram: número de hemácias 8,31 ± l,84 x 10(6)/ mi l; Volume globular 39 ± 6%; taxa de hemoglobina 12,89 ± 2,04g/dl; Volume Corpuscular Médio 48,19 ± 5,68fl; Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média 32,81 ± 1,84; reticulócitos 0,27 ± 0,54% e eritroblastos 214 ± 594/mil; número de leucócitos/mil 10593 ± 3008, neutrófilos bastonetes 97 ± 165; neutrófilos segmentados 4837 ± 2201; linfócitos 5222 ± 1909; eosinófilos 86 ± 139; monócitos 346 ± 221; basófilos 4 ± 24. Os fatores sexuais não apresentaram influência significativa sobre o hemograma, com exceção dos reticulócitos e eritroblastos. Os fatores etários apresentaram influência significativa (p≤0,03) sobre as curvas de regressão do hemograma, com o volume globular, hemácias e hemoglobina diminuindo e o CHCM e reticulócitos aumentando até os 3 a 7 dias, havendo uma inversão desta variação dos sete até os 30 dias. A curva de regressão do percentual de linfócitos aumentou e de neutrófilos diminuiu gradativamente após o nascimento. O encontro destas curvas ocorreu entre o sétimo e o décimo quarto dia de vida.

Changes on the hemogram parameters were evaluated for healthy Nelore purebreed bovines at the first month age, with 71 male and 56 female, and raised in São Paulo State, Brazil. For this purpose, 127 samples of blood were collected, and divided in five groups ; 0-3 , 3-7 . 7-14 , 14-21 and 21-30 days of age. The mean values were: erithrocyte counts 8.31± 1.84 x 10(6)/ mu l; Package Cell Volume 39 ± 6%: hemoglobin 12.89 ± 2.04g/dl; Mean Corpuscular Volume 48.19 ± 5.68fl; Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration 32.81 ± 1.84 ; Reticulocytes 0.27 ± 0.54%; erythroblast 214 ± 594/mul; leukocytes (mu l): 10593 ± 3008; band neutrophils 97 ± 165; segmented neutrophils 4837 ± 2201; lymphocytes 5222 ± 1909; eosinophils 86 ± 139: monocytes 346 ± 221; basophils 3 ± 24. Sex had no influencing the hemogram values except to reticulocytes and erythroblast that were higher in females. Age significantly influenced the leucogram and eritrogram values (p≤0.0 3). The Package Cell Volume, erythrocytes, and hemoglobin decreasing and the Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration and reticulocytes increasing until the thirth to seventh days. There was an subsequent inversion of this variation in this period until the thirtieth day. The lymphocyte percentage regression curve increasing and neutrophils decreasing after birth. The intersection between the two leukocytes curves occurred between the seventh and the fourteenth day of life.